使用液相色谱荧光检测器快速检测多环芳烃（PAHs），确保海产品的安全

方法优势
■ 筛选海产品中的多环芳烃（PAHs）用时不到4分钟
■ 通过更快、更简单的样品制备取得准确的结果
■ 通过使用荧光检测进行选择性测定
沃特世解决方案
配有荧光检测器的ACQUITY UPLC@ H-Class系统
DisQuETM基质分散样品制备试剂盒
Empower™ 2软件
关键词
多环芳烃，PAHs，QuEChERS，荧光检测，食品安全
目的
证实DisQuE基质分散样品制备试剂盒和UPLC®-FLR的组
合能够提供一种适合海产品中PAHs检测的快速筛选工具。
引言
以往重大漏油事件，如：1989年瓦尔迪兹号（ExxonValdez）漏油和2010年4月墨西哥湾漏油事件，已经引起人们对出自这些地区的海产食品质量的担忧。鱼、甲壳类动物以及软体动物可能会接触或摄食石油，从而给消费者带来潜在的健康风险。在石油中发现的多种化合物中，一组重要的化合物是多环芳烃（PAHs）。美国环境保护局（US EPA）已经将这些化合物确定为重点污染物1。美国食品药品管理局（US FDA）还确定了多个方面的问题，包括鱼类中苯并（a）芘的含量达3.5 x 10-2mg/kg，牡蛎中菲和蒽的总含量达2.0 x 103mg/kg。2如果PAHs的含量达到关注水平的一半，则必须进行确证实验分析2。为避免食用受污染的海产食品并尽可能减小对海产食品业的影响，需要采用一种快速筛选法对这些令人担忧的化合物进行分析。我们在这里证明了通过使用.
DisQuE基质分散样品制备试剂盒（QuEChERS）进行简单萃
取后，配有荧光检测器的ACQUITY UPLC H-Class系统可用不
到4分钟的时间完成一次PAHs分析。
试验
LC条件
系统： 带大容量流动池（LV FC）的ACQUIT Y UP LC
H-Class
色谱柱： PAH 4.6 x 50 mm，3μm
柱温： 35℃
进样量： 10μL
采样率： 20点/秒
检测： 采用程序定时控制荧光检测波长变化
软件： Empower 2
流动相A： Milli-Q 水
流动相B： 甲醇，Fisher最优级
流动相C： 乙腈，Fisher最优级
 

标准品： PAH认证标准，AccuStandard M 8310
流速： 2.0 mL/min
梯度程序： 时间 流速 %A %B %C 梯度线型
     （ 分钟） （mL/min）
     0.00 2.0 30 70  0
     2.25 2.0  0 70 30  6
     3.50 2.0  0  0 100 6
     3.60 2.0  30 70  0  6
样本制备
用食品加工机按Ramalhosa等人3描述的方法对鱼肉块（比目鱼）、带壳虾以及带水的去壳牡蛎分别进行均质化处理。每个样品取15g均质后的组织到离心管中，按三种不同水平加入认证的PAH标准溶液。向鱼和虾样品中加入5ml水来帮助混合，牡蛎不需要另外加水。加标后的各种样品彻底混合，并允许在室温下放一个小时。向每个离心试管中加入DisQuE管（P/N 186004571）的试剂，即6 g硫化镁 + 1.5 g醋酸钠以及15 mL乙腈。用力摇动试管至少1分钟，从而形成海产食品组织、缓冲盐和乙腈的一种乳浊液。这次还按照Ramalhosa3的程序进行，因为既未向乙腈中加入醋酸，也没有执行二次PSA清洗步骤。我们试验室的初期工作证明，对于带荧光检测器的液相色谱法分析不必采取PSA步骤（数据未公布）。按3000 rpm的转数离心5分钟后，一部分乙腈浮层被转移至一个自动取样管进行进样。1μg/g和10μg/g浓度的加标样品分别用1:10和1:100的乙腈稀释。用6-点线性校正曲线对样品进行定量。标准曲线是用乙腈稀释认证的标准品来绘制的。

 

结果和讨论
分散样品制备通常也称为QuEChERS，是用于食品中农药分析的一种行之有效和快速的样品制备方法4。就在最近，该方法已被用来从食品基质中萃取其他污染物，包括多环芳烃3。
利用ACQUITY UPLC H-Class系统，在短短的3.5分钟内就将被US EPA列为重点污染物的15种荧光PAHs分离出来了。分析物的分离如图2所示，箭头所指向的是程序定时控制波长的变化。

图3所示为以10μg/g的浓度加标的虾、鱼和牡蛎基质的色谱图实例。如图3D中所示，同样通过样品制备程序制备出的空白水样显示了非常清晰的色谱图。本样品制备程序中使用的未加标型海产食品基质的实例同样未见基质干扰，如图4所示。

各样品按照每一种分析物的6-点校正曲线进行定量。苯并(a)芘的示范校正曲线如图5所示。所有分析物的线性系数（R2）> 0.995。通过Waters DisQuE基质分散样品制备试剂盒，从三种不同的海产品基质中提取多环芳烃。虾、鱼和牡蛎的回收率和RSD百分比如表1～表3所示。回收率范围为68%～149%。表4中列出了一系列QC水样加标的回收率，按所列水平浓缩，并贯穿于前述样品制备过程。这些结果对于所有化合物在每一种添加水平下都非常好，除了水中的苊的最低添加水平外（5 ng/g）。在该低水平上，由于峰面积小而且基线倾斜导致苊的检测结果变化波动很大，所以只能在这个水平以上检出。表5

是根据7份各种海产品基质按5 ng/g的浓度加标后估算出的检测限，计算依据为US EPA 40 CFR，附录B至第136部
分，修订号1.15.应用说明证实了DisQuE基质分散样品制备试剂盒和液相荧光色谱法的组合能够提供一种适合海产品中PAH检测的快速筛选工具。

■ 分散样品制备提供了从不同海产品基质中提取多环芳烃的快速有效的方法。
■ 实践证明，该方法比其他样品制备技术更有优势，因为通过很少的样品制备和较短的时间就能够得到准确
的结果3。

表5 加标型虾、鱼和牡蛎的检测限（LOD），根据每种海产品基质在5 ng/g浓度下个7个单标的检测结果计算出标准方差，计算依据为US EPA 40 CFR，附录B至第136部分，修订号1.1.

■ 鉴于样品制备的时间缩短了，快速色谱分离对于通过该方法来分析样品、标准和相关QC样品十分重要。
■ ACQUITY H-Class系统的分离时间还不到4分钟，能够满足方法要求。
■ 本解决方案可帮助实验室筛选海产食品中的PAHs，并能经济、及时地给出结果；这样，消费者就可对这些产品的安全性感到放心。
参考文献
[1] USEPA Method 8310 “ PolyNuclear Aromatic Hydrocarbons “
修订号 0，1986年9月。
[2] Gratz et. al., “SCREEN FOR THE PRESENCE OF POLYCYCLIC
AROMATIC HYDROCARBONS IN SELECT SEAFOODS USING LCFLUORESCENCE”,
USFDA Laboratory Information Bulletin,
页：2010年7月29日
[3] Ramalhosa等人，“Journal of Separation Science”，2009，
32，页码： 3529-3538.
[4] Anastassiades等人，Journal of the AOAC Int，2003，86，
页码： 412.
[5] EPA 40 CFR，第136部分之附录B，修订号：1.1 页码 566.